Ly-6K Double Nickase Plasmid (h): sc-404264-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ly-6K Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ly-6K Double-Nickase-Plasmid (h) und Ly-6K Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LY6K abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ly-6K: sc-393560
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ly-6K Double Nickase Plasmid (h) | sc-404264-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ly-6K Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404264-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LY6K kodiert das humane, über einen Glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-Anker membrangebundene Oberflächenprotein Ly-6K, ein Mitglied der Ly6/uPAR-Superfamilie, das an der Zell-Zell-Kommunikation und der Modulation membrannaher Signalprozesse beteiligt ist. Die Expression von Ly-6K wurde mit Veränderungen im Verhalten epithelialer Zellen in Verbindung gebracht, darunter Proliferation, Migration und Invasion, was mit Funktionen in Signalwegen vereinbar ist, die an der Plasmamembran Adhäsionsdynamik und Wachstumsfaktorsignale integrieren. Eine fehlregulierte LY6K-Expression wird bei mehreren Tumorarten beschrieben und häufig als Marker oncogener Programme und aggressiver zellulärer Phänotypen untersucht. Diese Eigenschaften machen LY6K zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien der Tumorbiologie, der Regulation von Membransignalen und krebsassoziierter Transkriptionszustände.
Ly-6K Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LY6K-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LY6K abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LY6K-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LY6K-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.