Plasmide CRISPR/Cas9 KO LTK (h): sc-405150

Présentation

La tyrosine kinase du récepteur leucocytaire (LTK) code un récepteur à activité tyrosine kinase qui participe à une signalisation répondant aux facteurs de croissance et à la modulation de cascades en aval telles que MAPK/ERK et PI3K/AKT, influençant la prolifération, la différenciation et la survie cellulaires. L’activité de LTK a été associée à la régulation de programmes de sécrétion et de trafic intracellulaire dans certains types cellulaires, notamment des lignées liées au système immunitaire, ce qui concorde avec des rôles dans le contrôle de l’état cellulaire. Une signalisation des récepteurs tyrosine kinases dérégulée, incluant une expression de LTK altérée ou une activité kinase modifiée, est pertinente pour l’étude des réseaux de signalisation oncogénique et de la transformation spécifique de lignée. En tant que récepteur de surface couplé à une kinase, LTK est également utilisé comme nœud pour disséquer la signalisation sur phosphotyrosines, le dialogue entre récepteurs (crosstalk) et le remodelage des voies sous perturbation génétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LTK (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LTK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LTK, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LTK à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LTK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LTK pour l'étude de la signalisation de LTK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LTK essentiels à la fonction de LTK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LTK pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LTK plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LTK plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LTK. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LTK plasmide HDR (h) et le LTK (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LTK pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LTK définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.