Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP6 (h): sc-400844

Présentation

LRP6 (low-density lipoprotein receptor-related protein 6) est un co‑récepteur transmembranaire à passage unique, essentiel à la signalisation canonique Wnt/β‑caténine. Il forme des complexes induits par le ligand avec les récepteurs Frizzled, favorisant le recrutement de Dishevelled et l’inhibition du complexe de destruction de la β‑caténine. Par cette voie, LRP6 régule la mise en place des plans d’organisation embryonnaires, le maintien des cellules souches, la prolifération et la différenciation cellulaires, et il peut intégrer des signaux provenant d’antagonistes extracellulaires tels que DKK et la sclérostine, qui modulent la disponibilité du récepteur. Une activité ou une expression altérée de LRP6 a été associée à une dérégulation de la signalisation Wnt observée dans des contextes variés, notamment en cancérologie, dans les phénotypes osseux et métaboliques, et dans les processus neurodéveloppementaux. En tant que nœud de signalisation proche de la membrane, LRP6 est fréquemment étudié afin d’analyser le trafic des récepteurs, l’assemblage du signalosome et les interactions entre voies (crosstalk) qui influencent les programmes transcriptionnels en aval de la β‑caténine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LRP6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LRP6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LRP6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRP6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LRP6 pour l'étude de la signalisation de LRP6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LRP6 essentiels à la fonction de LRP6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LRP6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LRP6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LRP6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRP6 plasmide HDR (h) et le LRP6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LRP6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LRP6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.