Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP4 (h): sc-401708

Présentation

LRP4 (protéine 4 apparentée au récepteur des lipoprotéines de basse densité) est un récepteur transmembranaire à passage unique de la famille des récepteurs LDL, qui agit comme corécepteur et plateforme d’assemblage de la signalisation à la surface cellulaire. Il est surtout connu pour son rôle dans le développement de la synapse neuromusculaire via la signalisation agrine–LRP4–MuSK, en coordonnant l’agrégation des récepteurs de l’acétylcholine et la maturation synaptique. LRP4 module également les sorties de signalisation liées aux voies Wnt/β-caténine et BMP en se liant à des ligands extracellulaires et en influençant la disponibilité de ces voies au niveau de la membrane. Des perturbations génétiques et auto-immunes de LRP4 ont été associées à des troubles de la jonction neuromusculaire et à des phénotypes squelettiques, soulignant son importance dans le trafic des récepteurs, l’organisation synaptique et la mise en place des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRP4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LRP4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LRP4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LRP4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRP4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LRP4 pour l'étude de la signalisation de LRP4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LRP4 essentiels à la fonction de LRP4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LRP4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LRP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LRP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LRP4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LRP4 plasmide HDR (h) et le LRP4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LRP4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LRP4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.