LRP4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401708-ACT

LRP4 (proteína 4 relacionada ao receptor de lipoproteína de baixa densidade) é um receptor transmembranar de passagem única que atua como um organizador essencial da sinalização de ligantes extracelulares na superfície celular. Em tecidos humanos, a LRP4 participa de redes de sinalização mediadas por Wnt e agrina que regulam a organização de sinapses, o agrupamento de receptores e o padrão de formação tecidual, apoiando processos como a formação da junção neuromuscular e a homeostase esquelética. Por meio de interações com ligantes secretados e co-receptores, a LRP4 influencia programas transcricionais a jusante que controlam a comunicação célula–célula e a sinalização do desenvolvimento. A desregulação da expressão ou da função de LRP4 tem sido associada a fenótipos neuromusculares e relacionados ao osso, tornando-a um alvo relevante para estudos mecanísticos de sinalização sináptica e biologia musculoesquelética.

LRP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRP4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRP4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRP4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRP4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP4 em células tumorais com expressão de LRP4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.