Plasmide CRISPR d'Activation (h) LRP130: sc-402029-ACT

LRPPRC code la protéine contenant des répétitions pentatricopeptides riches en leucine (LRP130), un facteur de liaison à l’ARN qui se localise principalement dans les mitochondries et régule la maturation post‑transcriptionnelle, la stabilité et la traduction des transcrits codés par le génome mitochondrial. En coordonnant l’expression des composants de la phosphorylation oxydative, LRP130 favorise l’assemblage de la chaîne respiratoire, le métabolisme énergétique mitochondrial et l’adaptation cellulaire au stress métabolique. LRPPRC intervient également dans le contrôle qualité de l’expression génique mitochondriale et peut influencer les voies de communication mito‑nucléaires. Une dérégulation de LRPPRC a été associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale et à la physiopathologie de maladies neuro‑métaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la bioénergétique et de l’homéostasie mitochondriale.

LRP130 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LRPPRC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LRP130 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LRPPRC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LRPPRC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LRP130. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LRPPRC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LRP130 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LRP130 dans les cellules tumorales présentant une expression de LRPPRC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.