LRP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401589-ACT

Das Major-Vault-Protein (MVP), auch als lung resistance-related protein (LRP) bezeichnet, ist die wichtigste strukturelle Komponente von Vault-Ribonukleoproteinpartikeln, die an intrazellulärem Transport, Signalintegration und der Anpassung an zellulären Stress beteiligt sind. Das humane MVP/LRP wurde mit der Regulation des nukleozytoplasmatischen Transports und der Vesikeldynamik in Verbindung gebracht und steht in Wechselwirkung mit Überlebens- und Entzündungssignalnetzwerken, darunter PI3K–AKT-, MAPK- und NF-κB-assoziierte Prozesse. Veränderte MVP-Expression wird häufig im Kontext von Arzneimittelantwort, oxidativem Stress und Immunmodulation untersucht und wurde in zahlreichen onkologischen und neuroinflammatorischen Forschungsarbeiten beschrieben. Diese Eigenschaften machen MVP/LRP zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen der Proteostase, der zellulären Entgiftung und der Umverdrahtung von Signalwegen unter Stress zu analysieren.

LRP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MVP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LRP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MVP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MVP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LRP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MVP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LRP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LRP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MVP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.