Plásmido CRISPR de Activación (h) LRIG2: sc-404443-ACT

LRIG2 (repeticiones ricas en leucina y dominios tipo inmunoglobulina 2) es una proteína transmembrana de paso único implicada en la modulación de la señalización de receptores tirosina cinasa en la superficie celular, influyendo en las vías posteriores que regulan la proliferación, la diferenciación y la supervivencia. A través de sus dominios extracelulares LRR/tipo Ig, LRIG2 está en posición de moldear la amplitud y la duración de las respuestas a factores de crecimiento, con vínculos funcionales descritos en contextos de señalización asociados a la familia EGFR/ERBB. Se ha observado una expresión alterada de LRIG2 en múltiples perfiles transcripcionales asociados a enfermedades, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar la señalización desregulada, el control del destino celular y las interacciones con el microambiente en células humanas. Estas propiedades hacen de LRIG2 una diana relevante para investigar la regulación de vías próximas a la membrana y los programas de expresión génica asociados a un crecimiento celular anómalo.

LRIG2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LRIG2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LRIG2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LRIG2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LRIG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LRIG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LRIG2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LRIG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LRIG2 en células tumorales con expresión de LRIG2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.