LPL Double Nickaseプラスミド (h): sc-400751-NIC

LPLはリポタンパクリパーゼ（LPL）をコードしており、分泌されて血管内皮に係留される酵素である。LPLは、血中を循環するカイロミクロンおよびVLDL中のトリグリセリドを加水分解し、筋肉組織や脂肪組織に取り込まれる遊離脂肪酸を放出する。この活性は、脂質の取り込み・貯蔵・酸化の各プログラムを協調させるとともに、アポリポタンパク質やヘパラン硫酸プロテオグリカンが関与する脂質輸送およびリポタンパク質リモデリングの過程とも交差する。トリグリセリドに富むリポタンパク質のクリアランスにおける中心的役割を通じて、LPLは代謝恒常性や脂質異常症関連の表現型の研究で広く対象とされている。LPLの機能や制御の変化は高トリグリセリド血症や、それに続く心代謝リスクに関わる生物学的機構と関連しており、脂質代謝の機序研究における一般的な標的となっている。

LPL ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における LPL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、LPL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、LPLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、LPLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。