Plasmide Double Nickase (h) LPCAT1: sc-413287-NIC

LPCAT1 (lysophosphatidylcholine acyltransférase 1) est une acyltransférase associée au réticulum endoplasmique (RE) qui catalyse la réacylation de la lysophosphatidylcholine en phosphatidylcholine, soutenant ainsi la biogenèse membranaire et le remodelage des phospholipides au sein du cycle de Lands. En modulant la composition des espèces de phosphatidylcholine, LPCAT1 influence la courbure membranaire, le trafic vésiculaire et la signalisation dépendante des lipides, et contribue à la production de phospholipides du surfactant dans des contextes épithéliaux spécialisés. Une expression ou une activité altérée de LPCAT1 a été associée à des programmes de métabolisme lipidique dérégulés et a été étudiée dans des modèles de progression tumorale et de microenvironnements inflammatoires où la synthèse et le remodelage membranaires sont accrus. En tant que nœud du métabolisme des glycérophospholipides, LPCAT1 est fréquemment étudiée pour son impact sur les réponses au stress cellulaire, la prolifération et l’adaptation métabolique.

LPCAT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LPCAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LPCAT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LPCAT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LPCAT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.