Plasmide Double Nickase (h) LPAAT-η: sc-406893-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) LPAAT-η correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide LPAAT-η Double Nickase (h) et le plasmide LPAAT-η Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LPCAT4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) LPAAT-η | sc-406893-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) LPAAT-η | sc-406893-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LPCAT4 code la lysophosphatidylcholine acyltransférase 4 (LPAAT-η), une enzyme associée au réticulum endoplasmique qui remodèle les phospholipides membranaires en acylant des lysophospholipides pour générer de la phosphatidylcholine et des glycérophospholipides apparentés. Par cette activité du cycle de Lands, LPAAT-η influence la composition et la courbure des membranes ainsi que l’homéostasie des organites, avec des effets en aval sur le trafic vésiculaire, la dynamique des gouttelettes lipidiques et la signalisation induite par le stress. Des perturbations du remodelage des phospholipides et de l’activité des acyltransférases ont été associées à des altérations des voies de signalisation prolifératives et inflammatoires, ainsi qu’à une dérégulation métabolique, ce qui fait de LPCAT4 un nœud pertinent pour des études reliant le métabolisme lipidique à des phénotypes cellulaires associés aux maladies.
LPAAT-η Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LPCAT4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LPCAT4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LPCAT4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LPCAT4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.