LPAAT-η CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406893

Übersicht

LPCAT4 kodiert die Lysophosphatidylcholin-Acyltransferase 4 (LPAAT-η), eine membranassoziierte Acyltransferase, die die Reacylierung von Lysophospholipiden katalysiert und so Phosphatidylcholin sowie verwandte Glycerophospholipide erzeugt. Durch die Steuerung des Phospholipid-Remodelings trägt LPAAT-η zur Membranzusammensetzung, zur Homöostase von Organellen und zu lipidabhängigen Signalprozessen bei, die den vesikulären Transport und Stressantworten beeinflussen. Die Aktivität von LPCAT4 ist in den Lands-Zyklus und den breiteren Glycerophospholipidstoffwechsel eingebunden und beeinflusst die Verfügbarkeit von Lipidspezies, die die Rezeptorsignalgebung und entzündliche Signalwege modulieren. Eine dysregulierte Phospholipid-Umgestaltung wurde mit metabolischen und proliferativen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch LPCAT4 ein nützliches Ziel für die Untersuchung lipidgetriebener Mechanismen mit Relevanz für die Krebsbiologie, kardiometabolische Krankheitsmodelle und entzündungsassoziierte zelluläre Zustände darstellt.

Das LPAAT-η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LPCAT4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LPCAT4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LPCAT4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LPAAT-η-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LPCAT4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LPAAT-η-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LPCAT4-Exone abzielen, die für die LPAAT-η-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LPCAT4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LPAAT-η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LPAAT-η CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LPCAT4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LPAAT-η HDR-Plasmid (h) und LPAAT-η HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LPCAT4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LPCAT4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.