Plasmide CRISPR/Cas9 KO LOXL4 (m): sc-426632

Présentation

Loxl4 code la lysyl‑oxydase‑like 4 (LOXL4), une amine‑oxydase dépendante du cuivre qui catalyse la désamination oxydative des résidus de lysine dans le collagène et l’élastine, favorisant la réticulation covalente et la stabilisation de la matrice extracellulaire (MEC). Par le remodelage de la MEC, LOXL4 influence l’adhérence cellulaire, la migration et les programmes de mécanotransduction liés au développement et à la réparation des tissus. Une activité altérée de la famille LOXL a été associée au remodelage fibrotique et à des modifications de l’architecture du microenvironnement tumoral, ce qui rend Loxl4 pertinent pour étudier la régulation de l’inflammation, de la biologie vasculaire et des dynamiques épithélio‑mésenchymateuses pilotées par la MEC. Dans les modèles murins, la perturbation de Loxl4 soutient des travaux mécanistiques sur l’homéostasie du tissu conjonctif et les voies de signalisation dépendantes de la matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LOXL4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Loxl4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Loxl4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Loxl4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LOXL4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Loxl4 pour l'étude de la signalisation de LOXL4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Loxl4 essentiels à la fonction de LOXL4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Loxl4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LOXL4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LOXL4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Loxl4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LOXL4 plasmide HDR (m) et le LOXL4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Loxl4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Loxl4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.