Plasmide Double Nickase (h) LOXL1: sc-401965-NIC

LOXL1 code la lysyl‑oxydase‑like 1, une amine oxydase dépendante du cuivre qui catalyse la désamination oxydative des résidus de lysine de l’élastine et du collagène, favorisant la réticulation covalente et la maturation de la matrice extracellulaire. En régulant l’élastogenèse et la fibrillogenèse du collagène, LOXL1 contribue à la stabilité mécanique des tissus, à la signalisation cellule–matrice et aux processus de remodelage liés à la réparation des plaies et aux voies associées à la fibrose. Une activité ou une expression altérée de LOXL1 a été associée à la dérégulation de la matrice extracellulaire observée dans des affections telles que le syndrome d’exfoliation / glaucome exfoliatif et certains phénotypes de remodelage du tissu conjonctif. En biologie du cancer et dans la recherche sur le stroma, LOXL1 est étudiée pour son rôle dans l’organisation matricielle et son impact potentiel sur des microenvironnements permissifs à l’invasion.

LOXL1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LOXL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LOXL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LOXL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LOXL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.