Plásmido Doble Nickase (m) LOX: sc-421456-NIC

El gen **Lox** de ratón codifica la lisil oxidasa (LOX), una amino oxidasa secretada dependiente de cobre que cataliza la desaminación oxidativa de residuos de lisina en el colágeno y la elastina, promoviendo el entrecruzamiento covalente y la maduración de la matriz extracelular (MEC). La actividad de LOX determina la rigidez y la arquitectura de los tejidos, e influye en la adhesión y migración celulares, así como en vías de mecanotransducción vinculadas a la señalización de integrinas y a la dinámica de las adhesiones focales. La remodelación desregulada de la MEC dependiente de LOX se ha asociado, en sistemas modelo, con procesos fibróticos, una reparación anómala de heridas y cambios del microambiente relevantes para la progresión tumoral. Como enzima modificadora de la matriz, LOX se estudia con frecuencia por sus efectos sobre la biología del estroma, la integridad vascular y las respuestas de remodelación frente a la inflamación o la hipoxia.

LOX El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Lox en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Lox. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Lox. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Lox alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.