LIS1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422102

Übersicht

Pafah1b1 kodiert LIS1, ein dyneinbindendes regulatorisches Protein, das den mikrotubuliabhängigen Transport, die Positionierung des Zentrosoms und die Organisation der mitotischen Spindel steuert. In Mauszellen unterstützt LIS1 die Proliferation neuronaler Vorläuferzellen und die neuronale Migration, indem es die Prozessivität von zytoplasmatischem Dynein–Dynactin fein abstimmt und die Bewegung von Fracht an das Mikrotubuli-Netzwerk koppelt. Diese Funktionen greifen mit Signalwegen der Zytoskelett-Umgestaltung und der Zellzyklusprogression ineinander, die während der Entwicklung die Gewebearchitektur prägen. Störungen LIS1-assoziierter Prozesse werden mit neuroentwicklungsbedingten Phänotypen in Verbindung gebracht, die durch abnorme kortikale Schichtung und eine beeinträchtigte neuronale Positionierung gekennzeichnet sind.

Das LIS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pafah1b1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pafah1b1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pafah1b1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LIS1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pafah1b1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LIS1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pafah1b1-Exone abzielen, die für die LIS1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pafah1b1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LIS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LIS1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pafah1b1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LIS1 HDR-Plasmid (m) und LIS1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pafah1b1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pafah1b1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.