Particules Lentivirales d'Activation (h) Limkain b1: sc-411308-LAC

KIAA0430 code la protéine humaine Limkain b1, un facteur encore mal caractérisé impliqué dans la régulation du cytosquelette et l’organisation intracellulaire. Les annotations disponibles et les prédictions au niveau des domaines suggèrent un rôle dans des processus associés à l’actine, pouvant influencer la morphologie cellulaire, l’adhésion et la motilité via des voies recoupant la signalisation des GTPases de la famille Rho et les réseaux de remodelage de l’actine. Une dérégulation du contrôle de ces processus est fréquemment associée aux programmes anormaux de prolifération et de migration observés dans le cancer et d’autres maladies complexes. En conséquence, KIAA0430/Limkain b1 présente un intérêt pour des études mécanistiques des phénotypes dépendants du cytosquelette et de la connectivité des voies dans des modèles cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales Limkain b1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de KIAA0430 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Limkain b1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription KIAA0430, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Limkain b1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif KIAA0430 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.