Plasmide CRISPR d'Activation (h) LGP2: sc-406991-ACT

DHX58 code pour LGP2, un capteur de type hélicase ARN de la famille DExD/H-box qui module la détection cytosolique de l’ARN viral et façonne la signalisation antivirale innée. LGP2 interagit avec les voies des récepteurs de type RIG-I, influençant l’induction des interférons de type I et des gènes stimulés par les interférons (ISG) dépendante de MAVS, et peut ajuster l’amplitude ainsi que la durée des programmes transcriptionnels inflammatoires. En régulant la détection de l’ARN et les réponses en aval pilotées par NF-κB et les facteurs IRF, DHX58 contribue à l’homéostasie immunitaire cellulaire et à la restriction des agents pathogènes. Une activité DHX58/LGP2 dérégulée et une signalisation des interférons altérée ont été associées à une susceptibilité accrue aux infections virales, à l’inflammation chronique et à des phénotypes immunitaires liés aux interférons, pertinents pour l’immunologie et la recherche sur les interactions hôte–pathogène.

LGP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DHX58 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LGP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DHX58 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DHX58, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LGP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DHX58 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LGP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LGP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de DHX58 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.