Plasmide CRISPR/Cas9 KO leupaxin (m): sc-430706

Présentation

Le gène murin **Lpxn** code la leupaxine, une protéine adaptatrice des adhérences focales contenant des domaines LIM, qui s’associe à des complexes liés aux intégrines et à des protéines régulatrices de l’actine afin de coordonner le remodelage du cytosquelette. La leupaxine participe à des voies de signalisation dépendantes de l’adhérence impliquant la kinase des adhérences focales (FAK) et les kinases de la famille Src, influençant l’étalement cellulaire, la migration et la mécanotransduction. Dans des contextes immunitaires et mésenchymateux, elle peut moduler des programmes transcriptionnels via des interactions avec des récepteurs nucléaires et d’autres co‑régulateurs. Une signalisation des adhérences focales dérégulée et une expression altérée de la leupaxine ont été associées à des comportements cellulaires invasifs et à la dynamique du microenvironnement inflammatoire, ce qui souligne sa pertinence pour l’étude de la biologie du cancer et du trafic des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO leupaxin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lpxn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lpxn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lpxn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine leupaxin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lpxn pour l'étude de la signalisation de leupaxin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lpxn essentiels à la fonction de leupaxin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lpxn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le leupaxin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le leupaxin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lpxn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le leupaxin plasmide HDR (m) et le leupaxin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lpxn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lpxn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.