leupaxin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430706

Übersicht

Das murine Gen **Lpxn** kodiert **Leupaxin**, einen fokale-Adhäsions-Adaptor mit LIM-Domänen, der mit integrinassoziierten Komplexen und actinregulierenden Proteinen zusammenwirkt, um den Umbau des Zytoskeletts zu koordinieren. Leupaxin ist an adhäsionsabhängigen Signalwegen beteiligt, an denen die fokale Adhäsionskinase (FAK) und Kinasen der Src-Familie mitwirken, und beeinflusst dadurch Zellspreitung, Migration und Mechanotransduktion. In immunologischen und mesenchymalen Kontexten kann es über Interaktionen mit nukleären Rezeptoren und weiteren Koregulatoren Transkriptionsprogramme modulieren. Dysregulierte Signale an fokalen Adhäsionen und eine veränderte Leupaxin-Expression wurden mit invasivem Zellverhalten und der Dynamik inflammatorischer Mikroumgebungen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zur Krebsbiologie und zum Trafficking von Immunzellen unterstreicht.

Das leupaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Lpxn-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Lpxn-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Lpxn nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die leupaxin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Lpxn-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der leupaxin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Lpxn-Exone abzielen, die für die leupaxin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Lpxn-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom leupaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom leupaxin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Lpxn-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das leupaxin HDR-Plasmid (m) und leupaxin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Lpxn-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Lpxn-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.