Lck CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-421397

개요

Lck(림프구 특이적 단백질 티로신 키나아제)는 Src 계열 키나아제로, CD3의 ITAM 모티프를 인산화하고 ZAP70의 모집과 활성화를 촉진함으로써 T 세포 수용체(TCR) 신호전달을 개시하며, 그 결과 하위 단계에서 LAT/SLP-76 시그널로좀(signalosome) 조립을 유도한다. 생쥐 면역세포에서 Lck는 항원 인식을 칼슘 유입, MAPK 활성화, 그리고 NFAT, NF-κB, AP-1에 의해 조절되는 전사 프로그램과 연결하는 근위(proximal) 신호 사건들을 조절하여 흉선세포 발달과 말초 T 세포 활성화를 형성한다. Lck 활성은 공동수용체(CD4/CD8) 신호와 통합되어 있으며, 인산화 의존적으로 활성/비활성 구조 사이를 전환함으로써 조절되기 때문에 림프구 신호 임계값 설정의 중심에 있다. Lck 의존 경로의 조절 이상은 조혈계 맥락에서 변화된 면역 활성, 림프구 증식, 비정상적 티로신 키나아제 신호전달을 설명하는 모델로 흔히 활용된다.

Lck CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Lck 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Lck 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Lck의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Lck 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Lck 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Lck 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Lck 기능에 중요한 Lck 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Lck 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Lck CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 Lck CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Lck 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Lck HDR 플라스미드 (m) 및 Lck HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Lck 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Lck 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.