Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) LAT: sc-421389-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)LAT consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LAT (m) y el plásmido de doble nickasa LAT (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Lat. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LAT Anticuerpo (11B.12): sc-53550
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) LAT | sc-421389-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen LAT (linker for activation of T cells) del ratón codifica una proteína adaptadora transmembrana que se fosforila rápidamente tras la activación del receptor de células T, creando sitios de anclaje para proteínas de señalización con dominio SH2. LAT organiza el signalosoma de LAT para acoplar quinasas proximales como LCK y ZAP70 a la activación de PLCγ1, el flujo de calcio, la señalización Ras–MAPK y las vías dependientes de PI3K que controlan la activación, la diferenciación y la producción de citocinas de las células T. La alteración de la señalización de LAT modifica la formación de la sinapsis inmunológica y la selección de células T, y la disfunción de la vía de LAT se asocia con desregulación inmunitaria y fenotipos linfoproliferativos en modelos experimentales. Como nodo central de la señalización inmunitaria adaptativa, LAT se estudia ampliamente en los mecanismos de tolerancia de las células T, la inflamación y la biología de las enfermedades inmunomediadas.
LAT El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Lat en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Lat. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Lat. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Lat alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.