Plásmido CRISPR de Activación (h) Laminin α-5: sc-401168-ACT

LAMA5 codifica la laminina α-5, una subunidad central de los heterotrímeros laminina-511 y laminina-521 que organizan las membranas basales y regulan la adhesión, la polaridad y la diferenciación de células epiteliales y endoteliales. Mediante interacciones con integrinas, distroglicano y otros receptores de la matriz extracelular, la laminina α-5 contribuye a la señalización de adhesiones focales y a vías downstream como FAK/Src, PI3K–AKT y MAPK, que coordinan la migración y la supervivencia. Las matrices ricas en LAMA5 moldean la arquitectura tisular en piel, glomérulo renal, pulmón y vasculatura, influyendo en la función de barrera y la morfogénesis. La deposición o señalización desregulada de laminina α-5 se asocia con una integridad alterada de la membrana basal y se ha estudiado en contextos como la fibrosis, la remodelación inflamatoria y los microambientes de invasión tumoral.

Laminin α-5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LAMA5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Laminin α-5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LAMA5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LAMA5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Laminin α-5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LAMA5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Laminin α-5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Laminin α-5 en células tumorales con expresión de LAMA5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.