Plasmide Double Nickase (h) La/SSB: sc-416582-NIC

Le gène humain **SSB** code la phosphoprotéine de liaison à l’ARN **La/SSB**, un facteur ubiquitaire qui s’associe aux transcrits de l’ARN polymérase III afin de protéger les ARN naissants et de favoriser leur maturation. La/SSB participe au contrôle qualité des ARN en stabilisant les pré‑ARNt, l’ARNsn U6, l’ARNr 5S et d’autres petits ARN, et contribue à la régulation de la traduction en situation de stress cellulaire via des interactions avec des ARNm spécifiques. Par ces fonctions, SSB fait le lien entre le métabolisme de l’ARN et des processus tels que l’assemblage des ribonucléoprotéines, les réponses au stress et le maintien de la protéostasie. Des auto‑anticorps dirigés contre La/SSB sont fréquemment observés dans les maladies auto‑immunes systémiques, notamment le syndrome de Sjögren et le lupus érythémateux systémique, ce qui en fait une cible moléculaire largement utilisée pour disséquer les voies ARN–protéine associées à l’immunité.

La/SSB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SSB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SSB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SSB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SSB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.