Plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP γ1 (m): sc-419413
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- L-type Ca++ CP γ1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique L-type Ca++ CP γ1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP γ1 (m) | sc-419413 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Cacng1 code la sous-unité auxiliaire γ1 des canaux calciques de type L, une protéine membranaire tétraspannante qui module les propriétés biophysiques et l’expression membranaire des complexes de canaux calciques voltage‑dépendants dans les tissus excitables. En ajustant l’influx de Ca++, elle influence le couplage excitation–contraction, la signalisation dépendante de l’activité et les voies en aval régulées par le Ca++ qui façonnent la physiologie musculaire et l’excitabilité cellulaire. Une régulation altérée des composants des canaux Ca++ de type L a été associée à des perturbations de l’homéostasie calcique liées à des phénotypes fonctionnels neuromusculaires et cardiaques, faisant de Cacng1 un locus utile pour disséquer la biologie des sous-unités auxiliaires de canaux dans des modèles murins. Les études fonctionnelles examinent souvent la manière dont les sous-unités γ affectent le gating du canal, son trafic et son couplage à des réponses transcriptionnelles dépendantes du Ca++.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO L-type Ca++ CP γ1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cacng1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cacng1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cacng1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine L-type Ca++ CP γ1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cacng1 pour l'étude de la signalisation de L-type Ca++ CP γ1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Cacng1 essentiels à la fonction de L-type Ca++ CP γ1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cacng1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le L-type Ca++ CP γ1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le L-type Ca++ CP γ1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cacng1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le L-type Ca++ CP γ1 plasmide HDR (m) et le L-type Ca++ CP γ1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cacng1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cacng1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.