Plasmide CRISPR d'Activation (h) Kremen-1: sc-403791-ACT

Le gène humain **KREMEN1** code la Kremen-1, un récepteur transmembranaire à passage unique qui sert de partenaire de liaison à haute affinité pour les protéines Dickkopf (DKK) et coopère avec LRP5/6 pour moduler la signalisation Wnt/β-caténine canonique. En favorisant l’internalisation de LRP6 dépendante de DKK, Kremen-1 influence les décisions de destin cellulaire, la prolifération et les programmes de différenciation, avec des effets en aval sur la mise en place des tissus et la dynamique épithélio-mésenchymateuse. L’activité de KREMEN1 s’articule avec les processus de trafic des récepteurs et d’endocytose qui déterminent l’amplitude et la durée du signal à la surface cellulaire. Une modulation dysrégulée de la voie Wnt impliquant Kremen-1 a été associée à des phénotypes du développement ainsi qu’à des contextes de signalisation liés au cancer, où la réponse à Wnt et la disponibilité des récepteurs sont altérées.

Kremen-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KREMEN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Kremen-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KREMEN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KREMEN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Kremen-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KREMEN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Kremen-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Kremen-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KREMEN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.