KRAS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416674-ACT

KRAS codifica uma pequena GTPase que atua como um interruptor molecular, alternando entre os estados ligados a GDP e a GTP para retransmitir sinais de receptores tirosina-quinase ativados para efetores a jusante. O KRAS ativo coordena vias-chave, incluindo as redes RAF–MEK–ERK (MAPK), PI3K–AKT–mTOR e RalGDS, para regular proliferação, sobrevivência, metabolismo e dinâmica do citoesqueleto. Um controle rigoroso da sinalização de KRAS é necessário para decisões normais de destino celular e para a homeostase tecidual. A atividade desregulada de KRAS e a reprogramação de vias são frequentemente implicadas na transformação oncogênica, em respostas alteradas ao estresse e em adaptações de sinalização associadas à resistência em múltiplos contextos tumorais.

KRAS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KRAS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KRAS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KRAS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KRAS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KRAS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KRAS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KRAS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KRAS em células tumorais com expressão de KRAS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.