Plasmide CRISPR d'Activation (h) KLC1: sc-401881-ACT

Le gène humain **KLC1** (kinesin light chain 1) code une sous-unité de chaîne légère du complexe moteur **kinésine‑1**, qui relie les adaptateurs de cargaison au transport dépendant des microtubules. En s’associant aux chaînes lourdes de la kinésine et à des protéines de liaison aux cargaisons, KLC1 soutient le trafic **antérograde** de vésicules, d’organites et de complexes protéiques, indispensable à la polarité neuronale, au transport axonal et au contrôle spatial de la signalisation. Le transport dépendant de KLC1 s’interface avec des voies régissant le trafic endosomal, la distribution des mitochondries et la fonction synaptique, où une livraison perturbée des cargaisons peut dérégler la protéostasie et les réponses au stress. Des altérations de l’expression de KLC1 ou de son couplage aux cargaisons ont été étudiées dans les maladies neurodégénératives et d’autres troubles caractérisés par des défauts de transport et un trafic intracellulaire dérégulé.

KLC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KLC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KLC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KLC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KLC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KLC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KLC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KLC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KLC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KLC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.