KIR4.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421234

Übersicht

Kcnj15 kodiert die inward-rectifying Kaliumkanal-Untereinheit KIR4.2, ein Membranprotein, das zur Kaliumleitfähigkeit beiträgt und dazu hilft, das Ruhe-Membranpotenzial in erregbaren und nicht erregbaren Zellen zu stabilisieren. Durch die Regulierung des K+-Flusses kann KIR4.2 das zelluläre osmotische Gleichgewicht, die Membranerregbarkeit sowie ionenabhängige Signalprozesse beeinflussen, die mit Transportwegen und der elektrophysiologischen Homöostase verknüpft sind. Veränderungen der Kaliumkanalaktivität sind für Studien zu renalem und epithelialem Transport, zur neuronalen und glialen Physiologie sowie zu stressresponsiven Signalnetzwerken von breiter Relevanz. Eine dysregulierte Ionenhandhabung und Kontrolle des Membranpotenzials wird zudem mit Mechanismen in Verbindung gebracht, die entzündlichen Reaktionen und Gewebedysfunktionen zugrunde liegen, wodurch Kcnj15 ein nützliches Ziel für die mechanistische Untersuchung von Signalwegen in Mausmodellsystemen darstellt.

Das KIR4.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Kcnj15-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Kcnj15-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Kcnj15 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIR4.2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Kcnj15-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIR4.2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Kcnj15-Exone abzielen, die für die KIR4.2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Kcnj15-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIR4.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom KIR4.2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Kcnj15-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIR4.2 HDR-Plasmid (m) und KIR4.2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Kcnj15-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Kcnj15-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.