KIR4.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421231

Descripción general

Kcnj10 codifica el canal de potasio rectificador hacia el interior KIR4.1, un regulador clave del amortiguamiento de K⁺ y del potencial de membrana en la glía y en otros tipos celulares que expresan KIR4.1 en el ratón. Al controlar la homeostasis del potasio extracelular y acoplar el equilibrio iónico al transporte de agua, KIR4.1 sostiene la excitabilidad neuronal, la transmisión sináptica y la osmorregulación tisular, con vínculos funcionales con la actividad de la Na⁺/K⁺-ATPasa y con la redistribución espacial de K⁺ mediada por astrocitos. La alteración de la función de KIR4.1 se ha asociado con señalización neuroglial anómala, cambios en la susceptibilidad a convulsiones y fenotipos más amplios del neurodesarrollo y neurológicos, lo que convierte a Kcnj10 en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la biología de los canales iónicos y la fisiología glial. En entornos experimentales, KIR4.1 también se utiliza para investigar cómo la conductancia de potasio influye en el metabolismo celular, la actividad de redes y las respuestas a lesión o inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Kcnj10 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Kcnj10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Kcnj10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIR4.1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Kcnj10 para la investigación de la señalización de KIR4.1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Kcnj10 críticos para la función de KIR4.1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Kcnj10 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIR4.1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido KIR4.1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Kcnj10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIR4.1 (m) y el plásmido HDR KIR4.1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Kcnj10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Kcnj10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.