KIR2.3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406604

Descripción general

KCNJ4 codifica el canal de potasio rectificador hacia el interior KIR2.3, una proteína de membrana tetramérica que conduce preferentemente K+ a potenciales hiperpolarizados para estabilizar el potencial de membrana en reposo y modular la excitabilidad celular. La actividad de KIR2.3 contribuye a la homeostasis del potasio y a la señalización eléctrica, influyendo en procesos como la repolarización del potencial de acción y el acoplamiento de la excitabilidad en tejidos excitables. Como parte de la familia Kir2.x, se integra funcionalmente con vías que dependen de la polarización de la membrana, incluidas la señalización dependiente de Ca2+ y el acoplamiento estímulo-secreción. La alteración de la función de los canales rectificadores hacia el interior es relevante en estudios de electrofisiología, mecanismos arritmogénicos y disfunción de células excitables, lo que convierte a KCNJ4 en una diana útil para desentrañar las contribuciones de los canales iónicos a los fenotipos celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KIR2.3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNJ4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNJ4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNJ4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KIR2.3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNJ4 para la investigación de la señalización de KIR2.3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNJ4 críticos para la función de KIR2.3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNJ4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KIR2.3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KIR2.3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNJ4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KIR2.3 (h) y el plásmido HDR KIR2.3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNJ4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNJ4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.