Plásmido CRISPR de Activación (h) Kinectin 1: sc-404296-ACT

El gen humano KTN1 codifica kinectina 1, un receptor asociado a la membrana del retículo endoplásmico (RE) para la kinesina, que ayuda a acoplar el transporte basado en microtúbulos con la organización y la dinámica del RE. A través de interacciones con motores de kinesina y redes del citoesqueleto, la kinectina contribuye al tráfico vesicular, al posicionamiento de orgánulos y al mantenimiento de la morfología del RE, procesos que influyen en la capacidad secretora y en la señalización intracelular. El transporte mediado por KTN1 y la homeostasis del RE se intersecan con vías que regulan el plegamiento de proteínas y las respuestas al estrés, incluida la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), y son relevantes para fenotipos asociados con conectividad neuronal alterada y cambios en la arquitectura celular. La alteración del acoplamiento entre RE y microtúbulos está implicada de forma amplia en la neurobiología y la migración celular, lo que convierte a KTN1 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación del transporte intracelular.

Kinectin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KTN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Kinectin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KTN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KTN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Kinectin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KTN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Kinectin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Kinectin 1 en células tumorales con expresión de KTN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.