KIF4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411788

Übersicht

KIF4A kodiert ein Motorprotein der Kinesin-Familie, das mit Mikrotubuli und Chromatin assoziiert und so die Organisation der mitotischen Spindel, die Chromosomenkondensation und die Segregation in der Anaphase koordiniert. Es wirkt in zentralen Zellzyklusprozessen, darunter die Zytokinese und die Regulation der Dynamik der Spindelmittelzone, und unterstützt damit eine zuverlässige Genomverteilung während der proliferativen Zellteilung. Die KIF4A-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen der DNA-Schadensantwort und des Chromatin-Remodelings, die die Genomstabilität und die Folgen von Replikationsstress beeinflussen. Eine fehlregulierte KIF4A-Expression wurde mit proliferativen Phänotypen und Signaturen genomischer Instabilität in verschiedenen onkologischen Forschungskontexten in Verbindung gebracht, was KIF4A zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien mitoseassoziierter Verwundbarkeiten macht.

Das KIF4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KIF4A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KIF4A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KIF4A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KIF4A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KIF4A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KIF4A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KIF4A-Exone abzielen, die für die KIF4A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KIF4A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KIF4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KIF4A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KIF4A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KIF4A HDR-Plasmid (h) und KIF4A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KIF4A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KIF4A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.