Plásmido CRISPR de Activación (h) KIF17: sc-403046-ACT

KIF17 (miembro 17 de la familia de quinesinas) codifica un motor de microtúbulos dirigido hacia el extremo plus que favorece el transporte intracelular en células polarizadas, con funciones destacadas en el tráfico de cargas neuronales y en la compartimentalización ciliar. Al acoplar la motilidad dependiente de ATP a la dinámica de los microtúbulos, KIF17 contribuye a procesos como el transporte dendrítico, la función sináptica y la regulación de vías de señalización asociadas al cilio. La expresión o localización alteradas de KIF17 se han estudiado en el contexto de fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, así como de defectos de tráfico y señalización relevantes para ciliopatías. Estas características hacen de KIF17 una diana útil para investigar el transporte basado en microtúbulos, la biología celular neuronal y las redes reguladoras vinculadas a los cilios.

KIF17 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KIF17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KIF17 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KIF17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KIF17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KIF17. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KIF17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KIF17 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KIF17 en células tumorales con expresión de KIF17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.