KIF17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403046-ACT

KIF17 (membro 17 da família das cinesinas) codifica um motor de microtúbulos dirigido à extremidade positiva, que dá suporte ao transporte intracelular em células polarizadas, com papéis de destaque no tráfego de cargas neuronais e na compartimentalização ciliar. Ao acoplar a motilidade dependente de ATP à dinâmica dos microtúbulos, o KIF17 contribui para processos como o transporte dendrítico, a função sináptica e a regulação de vias de sinalização associadas ao cílio. Alterações na expressão ou na localização de KIF17 têm sido estudadas no contexto de fenótipos do neurodesenvolvimento e de doenças neurodegenerativas, bem como de defeitos de tráfego e sinalização relevantes para ciliopatias. Essas características tornam o KIF17 um alvo útil para investigar o transporte baseado em microtúbulos, a biologia celular neuronal e redes regulatórias ligadas aos cílios.

KIF17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KIF17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIF17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KIF17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KIF17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIF17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KIF17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIF17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIF17 em células tumorais com expressão de KIF17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.