Plásmido CRISPR de Activación (h) KIF14: sc-408805-ACT

KIF14 codifica una proteína motora tipo kinesina que se localiza en el huso mitótico y el cuerpo medio, donde contribuye a la segregación cromosómica, la organización del huso y la citocinesis. Coordina el transporte dependiente de microtúbulos e interactúa con reguladores del huso central para garantizar una abscisión adecuada y la progresión del ciclo celular. La expresión desregulada de KIF14 se asocia con frecuencia a fenotipos proliferativos e inestabilidad cromosómica, lo que la vincula con vías que gobiernan la fidelidad mitótica y el mantenimiento del genoma. Como resultado, KIF14 se estudia habitualmente en modelos de control de la división celular, aneuploidía y biología tumoral para comprender cómo la actividad alterada de las kinesinas modifica los resultados mitóticos.

KIF14 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KIF14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KIF14 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KIF14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KIF14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KIF14. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KIF14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KIF14 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KIF14 en células tumorales con expresión de KIF14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.