Ki67 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421656

Panoramica

Mki67 codifica per la proteina marcatore della proliferazione Ki67, un fattore nucleare strettamente legato alla progressione del ciclo cellulare ed ampiamente espresso nelle cellule in attiva proliferazione, mentre è assente nelle cellule quiescenti. Ki67 si associa alla cromatina e alla periferia dei cromosomi mitotici, supportando l’organizzazione dei cromosomi e contribuendo al corretto svolgimento della mitosi e alla struttura del nucleolo durante l’interfase. La sua espressione si integra con i programmi fondamentali di controllo del ciclo cellulare, incluse le vie che regolano la replicazione del DNA, la mitosi e i checkpoint, rendendola ampiamente utilizzata per quantificare gli stati proliferativi in tessuti e cellule in coltura. Livelli deregolati di Ki67 sono spesso correlati a fenotipi iperproliferativi e vengono sfruttati in studi di biologia tumorale, rigenerazione tissutale ed espansione delle cellule immunitarie in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ki67 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mki67 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mki67 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mki67 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ki67.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mki67 per lo studio della segnalazione di Ki67, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mki67 critici per la funzione di Ki67
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mki67 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ki67 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ki67 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mki67. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ki67 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ki67 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mki67 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mki67 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.