Plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 2 (m): sc-426263

Présentation

Kdelr2 code le récepteur KDEL 2, un récepteur de récupération résident du Golgi qui reconnaît les motifs de type KDEL en C‑terminal des protéines solubles de la lumière du RE (réticulum endoplasmique) et assure leur transport rétrograde du Golgi vers le réticulum endoplasmique via des vésicules recouvertes de COPI. En maintenant la protéostasie du RE ainsi qu’une compartimentation adéquate des chaperons et des enzymes de repliement, le récepteur KDEL 2 soutient la fidélité de la voie de sécrétion et limite la signalisation de stress liée au contrôle qualité du RE. Cet axe de trafic recoupe la régulation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), la maturation des glycoprotéines et la dynamique du recyclage Golgi‑vers‑RE, qui influencent l’adaptation cellulaire au stress protéotoxique. La dérégulation du transport RE–Golgi et de la protéostasie a été associée à la neurodégénérescence, à des dysfonctionnements métaboliques et au remodelage sécrétoire des cellules cancéreuses, ce qui fait de Kdelr2 un nœud utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Kdelr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Kdelr2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Kdelr2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KDEL receptor 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Kdelr2 pour l'étude de la signalisation de KDEL receptor 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Kdelr2 essentiels à la fonction de KDEL receptor 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Kdelr2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KDEL receptor 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KDEL receptor 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Kdelr2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KDEL receptor 2 plasmide HDR (m) et le KDEL receptor 2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Kdelr2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Kdelr2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.