Plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 1 (m): sc-426938

Présentation

Kdelr1 code le récepteur KDEL 1, un récepteur de tri à sept domaines transmembranaires qui reconnaît des motifs de récupération de type KDEL en C-terminal sur des protéines solubles résidentes du réticulum endoplasmique (RE) et médie leur transport rétrograde du Golgi vers le RE. En effectuant un cycle entre le RE et le Golgi de manière dépendante du pH, le récepteur KDEL 1 contribue au maintien de la protéostase du RE, soutient une capacité de repliement adéquate et préserve la fidélité de la voie de sécrétion. Une perturbation du trafic RE–Golgi et du contrôle qualité du RE peut déclencher la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et modifier la sécrétion, des processus largement impliqués dans la sensibilité au stress et des phénotypes associés à la dégénérescence dans des systèmes expérimentaux. Dans des modèles murins, la perturbation de Kdelr1 est donc pertinente pour disséquer l’homéostasie de la voie de sécrétion et les réponses cellulaires au stress dans des tissus immunitaires, neuronaux et métaboliquement actifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Kdelr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Kdelr1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Kdelr1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KDEL receptor 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Kdelr1 pour l'étude de la signalisation de KDEL receptor 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Kdelr1 essentiels à la fonction de KDEL receptor 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Kdelr1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KDEL receptor 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le KDEL receptor 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Kdelr1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KDEL receptor 1 plasmide HDR (m) et le KDEL receptor 1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Kdelr1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Kdelr1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.