KDEL receptor 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426938

Visão geral

Kdelr1 codifica o receptor KDEL 1, um receptor de triagem com sete domínios transmembrana que reconhece motivos de recuperação do tipo KDEL na extremidade C-terminal de proteínas solúveis residentes do RE e medeia o seu transporte retrógrado do Golgi para o RE. Ao ciclar entre o RE e o Golgi de forma dependente do pH, o receptor KDEL 1 ajuda a manter a proteostase do RE, sustenta a capacidade de dobramento adequado e preserva a fidelidade da via secretora. A perturbação do tráfego RE–Golgi e do controlo de qualidade do RE pode desencadear a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) e alterar a secreção, processos amplamente implicados na sensibilidade ao stress e em fenótipos associados à degeneração em sistemas experimentais. Em modelos de rato, a perturbação de Kdelr1 é, portanto, relevante para dissecar a homeostase da via secretora e as respostas celulares ao stress em tecidos imunitários, neuronais e metabolicamente ativos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Kdelr1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Kdelr1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Kdelr1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KDEL receptor 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Kdelr1 para a investigação da sinalização de KDEL receptor 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Kdelr1 críticos para a função KDEL receptor 1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Kdelr1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo KDEL receptor 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo KDEL receptor 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Kdelr1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo KDEL receptor 1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR KDEL receptor 1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Kdelr1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Kdelr1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.