KCNQ5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403289-ACT

KCNQ5 codifica a subunidade Kv7.5 de um canal de potássio voltagem‑dependente, membro da família KCNQ/Kv7, que contribui para a repolarização da membrana e para o controlo da excitabilidade celular. Ao conduzir correntes de potássio do tipo M, KCNQ5 ajuda a regular o potencial de membrana em repouso e as propriedades de disparo em células excitáveis, integrando-se com processos de transporte iónico e de sinalização dependente de cálcio. Alterações na atividade dos canais KCNQ são amplamente relevantes para a neurofisiologia e a sinalização sensorial, e a desregulação da condutância de potássio tem sido associada a perturbações que envolvem excitabilidade neuronal anómala e atividade de rede alterada. Em contextos de investigação, a modulação de KCNQ5 é utilizada para estudar a biologia do canal, fenótipos eletrofisiológicos e efeitos ao nível de vias decorrentes de alterações no fluxo de potássio.

KCNQ5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KCNQ5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KCNQ5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KCNQ5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KCNQ5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KCNQ5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KCNQ5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KCNQ5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KCNQ5 em células tumorais com expressão de KCNQ5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.