KCNH1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405756

Descripción general

KCNH1 codifica un canal de potasio dependiente de voltaje (Kv10.1/Eag1) que regula el potencial de membrana y el flujo de potasio, modulando la excitabilidad celular y la señalización posterior dependiente de calcio. Más allá de sus propiedades eléctricas, la actividad de KCNH1 influye en la progresión del ciclo celular, la proliferación y la dinámica del citoesqueleto mediante mecanismos de control bioeléctrico y la modulación del canal dependiente de la fosforilación. Se ha descrito la expresión de KCNH1 en contextos neuronales y no neuronales, lo que vincula la actividad del canal con procesos como los patrones de disparo neuronal y la señalización dependiente de estímulos. La desregulación de KCNH1 se asocia con fenotipos del neurodesarrollo y se ha estudiado en el contexto de señales de crecimiento aberrantes en biología del cáncer, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de vías impulsadas por canales iónicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KCNH1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNH1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNH1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNH1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KCNH1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNH1 para la investigación de la señalización de KCNH1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNH1 críticos para la función de KCNH1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNH1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KCNH1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KCNH1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNH1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KCNH1 (h) y el plásmido HDR KCNH1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNH1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNH1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.