KBTBD6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409349

Übersicht

KBTBD6 (Kelch-Repeat- und BTB-Domäne-haltend 6) kodiert ein Protein der BTB–BACK–Kelch-Familie, das voraussichtlich als Substrat-Adaptor innerhalb CUL3-basierter E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexe fungiert. Über die BTB-vermittelte Bindung an Cullin und die Kelch-abhängige Substraterkennung ist KBTBD6 in der Lage, die Ubiquitinierung und den proteasomalen Abbau von Proteinen zu regulieren, die den Zellzyklus, die Zytoskelettorganisation und stressresponsive Signalwege steuern. Diese Prozesse der Proteinqualitätskontrolle beeinflussen Signalwege wie den ubiquitinabhängigen Abbau und damit verknüpfte Transkriptions- und Proliferationsprogramme. Eine Fehlregulation von Ubiquitin-Ligase-Adaptoren ist häufig mit veränderter Proteostase und Signalzuständen assoziiert, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen beobachtet werden, wodurch KBTBD6 für mechanistische Studien zur ubiquitinvermittelten Regulation relevant ist.

Das KBTBD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KBTBD6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KBTBD6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KBTBD6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KBTBD6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KBTBD6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KBTBD6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KBTBD6-Exone abzielen, die für die KBTBD6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KBTBD6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KBTBD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KBTBD6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KBTBD6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KBTBD6 HDR-Plasmid (h) und KBTBD6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KBTBD6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KBTBD6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.