karyopherin β2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403099

Descripción general

TNPO1 codifica la carioferina β2 (transportina-1), un receptor de importación regulado por RanGTP que reconoce señales de localización nuclear de tipo PY y media la importación nuclear selectiva de proteínas de unión a ARN y otras cargas a través del complejo del poro nuclear. Al gobernar el transporte nucleocitoplasmático, la carioferina β2 influye en el metabolismo del ARN, la dinámica de los gránulos de estrés y la regulación transcripcional, y se conecta con vías como el ciclo de Ran y la maquinaria de transporte del poro nuclear. La desregulación del tráfico dependiente de transportina se ha implicado en mecanismos relacionados con la deslocalización y agregación de proteínas, así como con programas de expresión génica alterados, lo que proporciona un punto de entrada funcional para estudiar defectos de transporte en estados celulares asociados a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO karyopherin β2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TNPO1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TNPO1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TNPO1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína karyopherin β2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TNPO1 para la investigación de la señalización de karyopherin β2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TNPO1 críticos para la función de karyopherin β2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TNPO1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido karyopherin β2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido karyopherin β2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TNPO1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR karyopherin β2 (h) y el plásmido HDR karyopherin β2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TNPO1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TNPO1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.