Plásmido Doble Nickase (h) karyopherin α2: sc-401484-NIC

KPNA2 codifica la carioferina alfa 2, un adaptador de importina-α que reconoce las señales clásicas de localización nuclear y coopera con la importina-β para mediar el transporte nucleocitoplasmático, regulado por la GTPasa Ran, a través del complejo del poro nuclear. Al controlar la entrada al núcleo de factores de transcripción, proteínas de reparación del ADN y reguladores del ciclo celular, KPNA2 influye en la progresión mitótica, la estabilidad del genoma y la señalización de la respuesta al estrés. La expresión desregulada de KPNA2 se ha vinculado a programas alterados de transporte nuclear y a fenotipos proliferativos en múltiples contextos de cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la regulación dependiente del transporte de la señalización oncogénica y de procesos asociados a la cromatina. La función de KPNA2 también es relevante para investigaciones sobre la dinámica de importación nuclear, la proteostasis y el control transcripcional dependiente del contexto.

karyopherin α2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KPNA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KPNA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KPNA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KPNA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.