Plasmide CRISPR d'Activation (h) K-cadherin: sc-401455-ACT

CDH6 code la K-cadhérine, une cadhérine classique qui assure l’adhésion cellule–cellule dépendante du Ca²⁺ par liaison homophilique et par couplage de sa queue cytoplasmique aux caténines et au cytosquelette d’actine. En organisant les jonctions d’adhérence, la K-cadhérine influence l’architecture épithéliale, l’inhibition de contact et la migration cellulaire coordonnée au cours du développement et du maintien des tissus. L’expression de CDH6 est marquée dans les lignages rénal et neural, et elle est souvent étudiée dans le contexte des dynamiques épithélio-mésenchymateuses et de la spécification des lignages. Des programmes de cadhérines dérégulés, notamment une expression altérée de CDH6, sont associés à des modifications d’adhérence et d’invasivité observées dans plusieurs modèles de maladie, ce qui fait de CDH6 un nœud utile pour étudier la signalisation des jonctions et les transitions d’état cellulaire.

K-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

K-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de K-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de K-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie K-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.