Plasmide CRISPR/Cas9 KO Junctophilin-3 (h): sc-409301

Présentation

JPH3 code la junctophiline-3, une protéine d’ancrage membranaire qui stabilise les complexes de jonction membranaire en reliant la membrane plasmique au réticulum endoplasmique/sarcoplasmique. Dans les neurones, la junctophiline-3 soutient des microdomaines localisés de Ca²⁺ ainsi que le couplage excitation–contraction/excitation–sécrétion en organisant des contacts qui influencent la signalisation du Ca²⁺, l’excitabilité membranaire et la fonction synaptique. Ces processus recoupent des voies qui contrôlent l’homéostasie intracellulaire du calcium, la signalisation du RE et les réponses dépendantes de l’activité. Une perturbation ou une expression altérée de JPH3 a été associée à des phénotypes neurodégénératifs, notamment la maladie Huntington-like 2, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la vulnérabilité dépendante du calcium et le dysfonctionnement neuronal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Junctophilin-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène JPH3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du JPH3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert JPH3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Junctophilin-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en JPH3 pour l'étude de la signalisation de Junctophilin-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de JPH3 essentiels à la fonction de Junctophilin-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de JPH3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Junctophilin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Junctophilin-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus JPH3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Junctophilin-3 plasmide HDR (h) et le Junctophilin-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie JPH3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles JPH3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.