JK-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-425927-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das JK-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- JK-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und JK-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Fam134b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
JK-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425927-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
JK-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-425927-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fam134b (auch bekannt als JK-1) kodiert ein im ER ansässiges Membranprotein, das als selektiver Autophagie-Rezeptor für die Retikulophagie (ER-Phagie) fungiert, indem es ER-Fragmente über Interaktionen mit LC3-Familienproteinen an die Autophagie-Maschinerie koppelt. Durch die Regulation des ER-Umsatzes und der Proteostase beeinflusst FAM134B Signalwege, die mit der Unfolded-Protein-Response, der Anpassung an ER-Stress und der zellulären Qualitätskontrolle unter metabolischer oder proteotoxischer Belastung verknüpft sind. Eine Störung der FAM134B-abhängigen ER-Phagie kann die Organellenhomöostase und Stresssignalwege verändern und ist damit relevant für mechanistische Untersuchungen zu Neurodegeneration, peripherer Neuropathie und weiteren Kontexten, in denen ER-Integrität und das Gleichgewicht der Autophagie die Zellphysiologie beeinflussen. In Mausmodellen bietet Fam134b einen gut handhabbaren Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie ER-selektive Autophagie mit Lipidverarbeitung, Membranumbau und stressresponsiven Transkriptionsprogrammen zusammenwirkt.
JK-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Fam134b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Fam134b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Fam134b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Fam134b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.