Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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JAM-A Double Nickase Plasmid (h): sc-400687-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das JAM-A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- JAM-A Double-Nickase-Plasmid (h) und JAM-A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf F11R abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: JAM-A: sc-53623
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
JAM-A Double Nickase Plasmid (h) | sc-400687-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
JAM-A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400687-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F11R kodiert das Junctional Adhesion Molecule A (JAM-A), einen Rezeptor der Immunglobulin-Superfamilie, der in Tight Junctions angereichert ist und dort die Integrität epithelialer und endothelialer Barrieren reguliert. JAM-A ist an der Zell-Zell-Adhäsion, der Etablierung der Zellpolarität und kontaktabhängiger Signalübertragung beteiligt und moduliert die Transmigration von Leukozyten durch Interaktionen mit Integrinen und Gerüstproteinen. Durch die Kopplung an junctionale Komplexe und Signalwege kleiner GTPasen beeinflusst JAM-A die Organisation des Zytoskeletts und die parazelluläre Permeabilität. Eine fehlregulierte Expression oder Lokalisation von JAM-A wurde mit entzündlicher Barriere-Dysfunktion und veränderten Zellmigrationsphänotypen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und vaskuläre Pathologien relevant sind.
JAM-A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des F11R-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von F11R abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die F11R-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit F11R-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.