Plásmido Doble Nickase (h) JAB1: sc-401302-NIC

COPS5 codifica JAB1 (CSN5), la subunidad catalítica del signalosoma COP9 que regula las ligasas de ubiquitina cullin-RING mediante la desnedilación, configurando así el recambio de proteínas dependiente de ubiquitina. Al modular la estabilidad y la actividad de reguladores clave del ciclo celular y de la respuesta al estrés, JAB1 influye en las respuestas al daño del ADN, la transducción de señales y programas transcripcionales vinculados a la proliferación y la diferenciación. JAB1 también se integra con vías como la señalización de AP-1 y redes de proteostasis que coordinan la adaptación celular a señales del entorno. La actividad desregulada de COPS5/JAB1 se ha asociado con un control del crecimiento alterado y fenotipos oncogénicos, lo que lo convierte en un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de señalización relevante para tumores y degradación proteica.

JAB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COPS5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COPS5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COPS5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COPS5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.