Plasmide Double Nickase (h) ITM2B: sc-403561-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ITM2B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ITM2B Double Nickase (h) et le plasmide ITM2B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ITM2B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ITM2B Antibody (C-8): sc-374362
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ITM2B | sc-403561-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ITM2B | sc-403561-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITM2B code une protéine membranaire intégrale de la famille des domaines BRICHOS, qui transite par les voies sécrétoire et endolysosomale et est enrichie dans les neurones. ITM2B contribue au traitement des protéines membranaires et à la protéostase, avec des rôles rapportés dans la régulation de la maturation de la protéine précurseur de l’amyloïde, le transport vésiculaire et l’homéostasie cellulaire associée aux neurites. La perturbation de la fonction d’ITM2B est liée à des phénotypes neurodégénératifs, notamment les démences familiale britannique et familiale danoise, et a été étudiée dans le contexte de la génération de peptides amyloïdogènes et des réponses au stress intracellulaire. Ces caractéristiques font d’ITM2B une cible pertinente pour explorer les voies reliant le trafic membranaire, le contrôle qualité des protéines et la vulnérabilité neuronale.
ITM2B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITM2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITM2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITM2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITM2B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.