ITM2B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421189

Übersicht

Itm2b kodiert das integrale Membranprotein ITM2B (auch als BRI2 bekannt), ein Typ-II-Transmembranprotein, das an Membrantransportprozessen sowie an der proteolytischen Verarbeitung innerhalb des sekretorischen und endolysosomalen Systems beteiligt ist. ITM2B trägt zur neuronalen Homöostase bei und wird mit der Regulation der Produktion amyloidogener Peptide in Verbindung gebracht, indem es über Interaktionen die Prozessierung von APP beeinflusst. In der Maus ist die Itm2b-Expression im Nervensystem angereichert und wird genutzt, um Signalwege zu untersuchen, die synaptische Aufrechterhaltung, Proteinkontrolle (Protein-Quality-Control) und lysosomale Funktion steuern. Veränderungen in der ITM2B-Biologie sind mit neurodegenerationsbezogenen Phänotypen assoziiert und bieten einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Untersuchung eines Ungleichgewichts der Proteostase und altersbedingter Neuropathologie.

Das ITM2B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Itm2b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Itm2b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Itm2b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ITM2B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Itm2b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ITM2B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Itm2b-Exone abzielen, die für die ITM2B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Itm2b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ITM2B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ITM2B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Itm2b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ITM2B HDR-Plasmid (m) und ITM2B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Itm2b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Itm2b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.