Plasmide Double Nickase (m) IRP-1: sc-418946-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) IRP-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IRP-1 Double Nickase (m) et le plasmide IRP-1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Aco1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IRP-1 Antibody (E-12): sc-166022
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) IRP-1 | sc-418946-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) IRP-1 | sc-418946-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La protéine murine Aco1 code la protéine régulatrice du fer 1 (IRP-1), une protéine cytosolique bifonctionnelle qui bascule entre une enzyme aconitase et un régulateur de liaison à l’ARN en fonction de l’état des clusters fer–soufre cellulaires. Sous sa forme liant l’ARN, l’IRP-1 reconnaît des éléments de réponse au fer (IRE) dans des ARNm cibles afin de coordonner l’absorption, le stockage et l’utilisation du fer, en modulant notamment des transcrits tels que le récepteur de la transferrine et la ferritine. Ce réseau post-transcriptionnel s’intègre à la biogenèse mitochondriale des clusters fer–soufre, aux réponses au stress oxydatif et au remodelage métabolique en situation de limitation en fer. Une activité d’IRP-1 dérégulée perturbe l’homéostasie du fer et l’équilibre rédox, faisant d’Aco1 un nœud clé pour étudier, dans des systèmes modèles, des phénotypes de type anémique, l’accumulation de fer associée à la neurodégénérescence et le stress métabolique lié à l’inflammation.
IRP-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Aco1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Aco1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Aco1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Aco1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.